Ифа

Суть метода

Иммуноферментное исследование — инструментально-лабораторная методика, построенная на молекулярной реакции «антиген-антитело», позволяющая обнаруживать специфичные белки в биологических материалах (образцах для исследования).  Такими белками могут быть энзимы, разнообразные микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибки), простейшие и т. д.

Основной принцип метода заключается в молекулярной реакции «антиген-антитело».

Антигеном является любая чужая молекула, попавшая в человеческий организм в составе микроба-возбудителя болезни. Антигены представляют собой, как правило, белковые молекулы. Кроме микроорганизмов таким «чужаком» могут быть клетки чужой крови, не совпадающие по группе или резус-фактору.

В ответ на попадание такого антигена в организме запускается иммунная реакция, которая направлена на защиту от любых чужих молекул. Это происходит за счет синтеза специальных агентов иммунной системы — антител (иммуноглобулинов). Каждое антитело подходит только к определенному антигену, и нейтрализует патогенного «чужака», связываясь с ним в единый комплекс. Именно процесс такого связывания и называют реакцией «антиген-антитело».

Виды антител

Все антитела (иммуноглобулины) делятся на 5 видов в зависимости от того, на каком этапе иммунного ответа они появляются:

• Класс М (IgM). Всплеск таких иммуноглобулинов наблюдается в течение нескольких первых суток после внедрения инфекции или другого патогенного агента. Приблизительно через 6 недель они начинают растворяться и исчезать.
• Класс G (IgG). Синтезируются на втором этапе, чтобы побороть болезнь. После полной ликвидации чужих молекул они продолжают присутствовать в крови в небольшом количестве для обеспечения иммунитета на случай повторного заражения.
• Класс А (IgА). Такие иммуноглобулины отвечают за защитные функции слизистых оболочек организма, через которые патогенным элементам проникнуть легче всего, так как слизистый эпителий гораздо тоньше и нежнее обычных кожных покровов.
• Класс Е (IgЕ). Эти специфические глобулины направляют свое действие против паразитарных инфекций, поражающих организм человека. Они появляются вне зависимости от того, какая система органов поражена паразитами.
• Класс D (IgD). Этот класс всегда обнаруживается даже у здоровых людей. У детей до 10 лет он постепенно нарастает, после чего его количество при условии абсолютного здоровья не изменяется. Если же показатель увеличивается выше нормы, то это может свидетельствовать о наступившей беременности, астмы, иммунодефицита и пр.

Для ИФА-диагностики чаще всего важны уровни иммуноглобулинов IgG, IgM и IgA. По их титрам можно узнать, переболел ли человек болезнью раньше или заразился в недавнем времени, выработался ли у него иммунитет или его организм беззащитен перед патологией.

Особенности проведения теста и расшифровка

В большинстве случаев для иммуноферментного исследования берется кровь больного. Но при определенных обстоятельствах может осуществляться забор тканей с поверхности стекловидного тела. У беременных женщин ИФА диагностика может проводиться посредством изучения состава околоплодных вод.

Забор крови выполняется с использованием шприца, при этом материал для исследования берут, как правило, из вены, походящей на внутренней стороне локтевого сгиба. Пациент при этом должен находиться в расслабленном состоянии, в положении сидя.

Особенности подготовки

Анализ крови на ИФА требует выполнения определенных подготовительных процедур:

• отказа от завтрака в день теста;
• прекращения приема препаратов, разжижающих кровь, и других фармакологических средств, способных повлиять на результаты (после предварительной консультации у лечащего врача);
• воздержания от курения в день исследования;
• отказа от употребления спиртного за день до забора крови;
• исключения приема наркотических веществ (в том числе, и медпрепаратов, которые их содержат).

Соблюдение таких правил подготовки к иммунохимическому анализу крови исключает возможность искажения данных.

Трактовка данных

Результаты исследования выдаются пациенту на руки, после чего он проходит повторную консультацию у специалиста. Расшифровка данных ИФА может быть положительной или отрицательной. При этом в расчет также принимаются цифры, обозначающие уровень иммуноглобулинов (если таковые были обнаружены).

Если ИФА отрицательный, это может говорить об отсутствии патологических процессов, либо о начальной фазе их развития. Также «минусовый» результат исследования наблюдается при выздоровлении пациента после пройденного курса терапии. Но подобные данные можно получить только по истечении определенного промежутка времени (1 – 2 месяцев).

Если иммуноглобулины IgA и IgM в крови отсутствуют, а анализ ИФ показал положительный результат на IgG, это может свидетельствовать о том, что у пациента сформировался стойкий иммунитет к определенному виду антигенов. Подобное происходит при иммунизации.

При высокой концентрации IgM на фоне отсутствия IgG и IgA речь может идти о воспалительном процессе, протекающем в острой фазе.

Что означает, если ИФА положительный для всех видов иммуноглобулинов? В подобных случаях речь может идти о рецидиве инфекционной патологии. При этом возникновение антител фиксируется только при острой фазе хронической болезни.

При переходе заболевания в фазу затухания показатели IgM будут отрицательными. А вот ИФА на IgG и IgA будет положительным.

Расшифровка результатов

После того как мы разобрали аббревиатуру ИФА и что это такое ─ выяснили, стоит перейти к трактовке результатов.

Здесь важно понимать, что если анализ проводили качественный, то результат будет лишь положительным или отрицательным. То есть диагностика либо подтверждает подозрения доктора относительно определенного диагноза, либо опровергает их.

В этом случае в бланке будут стоять символы «+» или «-» соответственно.

Лабораторные исследования

Применяемые реактивы «настроены» на конкретных возбудителей. Это дает возможность устранить ложноположительные тесты, указывающие на несуществующее заражение.

Исследования дают возможность выявить примерный период заражения, а также определить характер и тяжесть болезни. С помощью этого метода также определяют содержание каждого из иммуноглобулинов или их общую (суммарную) концентрацию, которая меняется в зависимости от периода и тяжести заболевания.

В разные периоды болезни выделяется несколько видов антител (иммуноглобулинов, Ig):

• IgM – образуются в острую фазу болезни, т.е. примерно через 2 недели после инфицирования. Затем их уровень постепенно падает.
• IgA – появляются в разгар инфекционного процесса. По мере выздоровления их содержание уменьшается. Если уровень IgA в ходе лечения не снижается, велика вероятность, что болезнь перешла в хроническую форму.
• IgG – выявляются на этапе выздоровления. Они могут долго обнаруживаться в организме даже после полного излечения. В некоторых случаях такие иммуноглобулины остаются в организме пожизненно. В такой ситуации ИФА крови показывает не имеющуюся, а когда-то перенесенную инфекцию.

Обнаружение IgM и IgG указывает на обострение хронического инфекционного процесса, поэтому считается неблагоприятным признаком.

Какие бывают иммуноглобулины

Открыто и изучено 5 основных классов иммуноглобулинов – IgА, IgM, IgG, IgD, IgE.  роль остальных еще до конца не выяснена и она находятся в стадии научного исследования.

Обратите внимание: наиболее важное в практической медицине значение имеют иммуноглобулины классов – А, М и G. Информативность определения основана на разных временных промежутках их появления, максимума и исчезновения

Рассмотрим этот вопрос более детально.

Основная задача иммуноглобулина А (IgA) заключается в защитных функциях слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы. При остром начале заболевания выявить их невозможно. Появляются эти защитные комплексы лишь со 2 недели начала заболевания, иногда позже. Основная масса иммуноглобулина А сосредоточена в слизистых тканях. Ориентировочно около 80%. Остальные антитела циркулируют в крови. Основная функция – обезвреживание и уничтожение микроорганизмов. После стихания острых проявлений заболевания количество этих иммуноглобулинов начинает уменьшаться и полностью уходит на сроке до 8 недель после начала болезни. Если IgA обнаруживаются в более поздние сроки, то это свидетельствует о хронизации процесса.

Главными и первыми маркерами острой фазы развивающейся патологии являются иммуноглобулины класса М (IgM). Обнаруживаются они к 5 суткам начала недомогания. Определить их наличие в крови можно около 6 недель. Затем они начинают быстро исчезать.

Остаточный иммунный ответ характеризует наличие в крови иммуноглобулинов класса G (IgG). Появление этих факторов в крови обнаруживается примерно через месяц после начала болезни. В дальнейшем они могут определяться в течение многих месяцев, лет и даже всю жизнь, выполняя защитную функцию от возврата (рецидива) болезни, а в некоторых случаях делая невозможным  вторичное развитие патологии. Если же количество иммуноглобулина G начало вновь расти, то можно подозревать повторное заражение. Подобный вывод можно сделать путем проведения двух-трех проб, сделанных с промежутком в 2 недели.

Иммуноглобулин Е (IgE) используется в практике паразитологии.

Иммуноглобулин D (IgD) располагается на B-лимфоцитах, находится в небольшой концентрации у здоровых людей. После 10 года жизни достигает максимальных значений. Количество иммуноглобулина D увеличивается при беременности, у больных системными заболеваниями соединительной ткани, бронхиальной астмой, заболеваниями, вызванные иммунодефицитным состоянием.

Как делают анализ

Основным материалом для иммуноферментного анализа является сыворотка крови. У пациента берут кровь из вены, потом её подвергают центрифугированию, чтобы избавиться от лишних кровяных телец. Вместо венозной крови можно использовать околоплодные воды, мазки со слизистых оболочек и спинномозговую жидкость.

Особенности подготовки

Для того чтобы сохранить точность результата, анализ сдаётся натощак, а за две недели до его выполнения отменяют приём противовирусных и противомикробных препаратов. Такие меры принимаются, чтобы исключить влияние внешних факторов на результаты исследования.

Порядок взятия пробы

Условия получения биологического материала крайне важны для точности будущего результата. Довольно многое зависит от техники забора крови и стерильности инструментов. Как правило, взятие кровяной сыворотки осуществляют так, чтобы проникновение иглы в окружающие вену ткани произошло в один прокол. Кровь должна стекать по стенке пробирки равномерно, чтобы входящие в её состав эритроциты не разрушились в процессе анализа.

Когда проводят исследование крови, и когда будет результат

Для того чтобы иммуноферментный анализ дал точный ответ, исследование проводят натощак утром. Временной промежуток, в который можно получить результат, составляет от одного до трёх дней. Срок получения заключения может быть сокращён до нескольких часов при участии врача, который сможет сразу же расшифровать показатели. Сущность анализа сводится к получению определённых антител или антигенов.

Иммуноферментный анализ проводится по такой схеме. Сначала получают образец биологической жидкости (чаще всего – сыворотка крови). Для исследования используют пластиковые планшеты с лунками, в которые помещены очищенные антигены интересующего возбудителя, если целью анализа является определение антител, или антитела, если оценивают антигены. Полученный у пациента биоматериал вносится в заполненные лунки, затем наблюдают за реакцией. Если в крови обследуемого есть искомые соединения, образуется иммунный комплекс «антиген-антитело», если нет – ничего не произойдёт. Для визуализации химического процесса в лунку вводят красящее вещество, которое реагирует с объединённой молекулой, и это фиксируется путём инструментальной оценки оптической плотности.